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植提中多糖类常用的提取方法

植提中多糖类常用的提取方法

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1、除蛋白
 
除蛋白的技术主要应用于动物多糖的提取,以新鲜组织或丙酮脱脂脱水的组织为原料,可用水或盐溶液提取部分黏多糖。但因大部分黏多糖是与蛋白质结合的,需用酶降解蛋白质部分或(和)用碱使多糖蛋白质间的键裂开,以促进黏多糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白质酶处理组织,可将提取过程简化。多糖中的游离蛋白质可用蛋白沉淀剂除去,少量蛋白质则用Sevag法除去。对于微生物多糖则用三氟三氯乙烷法;而植物多糖就可用三氯乙酸法脱游离蛋白质。
 
2、去离子
 
去离子是为以后进一步纯化及色谱分析作准备,最古老的去离子方法是透析法。必须选择一种规格适宜的透析膜,以免样品损失。透析法不仅能去盐,也可以除去各种小分子物质。使用柱离子交换法以达到去离子作用,本法比较简单,但是增大了溶液的体积,影响多糖的沉淀结果。
 
纤维滤器透析法根据膜技术而新发展起来的,以这种方式对大多数样品进行浓缩速度很快,而且温和,所以即使发生失活也是很少量的。利用不同孔径的膜有可能使大小不同的分子分级。但这个方法的分辨率要比分子筛色谱可能达到的小得多。
 
3、乙醇沉淀
 
用乙醇沉淀是一种从溶液中定量回收多糖的简单方法,由于不同性质或不同分子量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它同样也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离。要根据具体情况使用不同浓度的乙醇,其中需要考虑的包括多糖的浓度及盐浓度。